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        RACE技術

        更新時間:2021-12-15

        簡要描述:

        RACE技術是采用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。

        RACE技術實驗原理

              RACE技術是采用PCR 技術由已知的部分cDNA 順序來擴增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。

        3'RACE

        利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準*鏈cDNA.然后用一個基因特異引物GSP1(gene specific primer,GSP)作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為下游引物,以cDNA*鏈為模板,進行PCR循環,把目的基因3' 末端的基因片

        段擴增出來。



        5'RACE

        先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準*鏈cDNA.利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到*鏈的5'末端時自動加上3-5個(dC)殘基,退火后(dC)殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo(dG)通用接頭引物配對后,轉換為以SMART序列為模板繼續延伸而連上通用接頭(見Figure 2 )。然后用一個含有部分接頭序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作為上游引物,用一個基因特異引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作為下游引物,以SMART*鏈cDNA為模板,進行PCR循環,把目的基因5'末端的c基因 片段擴增出來。終,從2個有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產物中獲得全長cDNA,或者通過分析RACE產物的3'和5'端序列,合成相應引物擴增出全長cDNA。



        實驗流程:

        1、總RNA提取以及cDNA反轉錄

        2、根據已知序列設計引物,以cDNA模板進行擴增,驗證序列正確性

        3、RACE 擴增,并測序,使用錨定PCR(AnchoredPCR)與巢式PCR(Nested PCR)相結合的方法,分別進行3'末端和5'末端RACE并對其產物進行測序

        4、根據測序結果拼接目的基因全長cDNA序列

        5、將RACE產物進行TA克隆用于后續研究(可根據客戶要求自行選擇)

        服務優勢

        采用進口試劑,確保實驗準確性

        較同類產品方法更快速,便捷

        豐富的項目經驗,超過500例的成功案例

        提供全套的后續生物信息學分析服務(可根據客戶要求提供個性化分析服務)

        服務流程

        1、確認客戶提供的序列信息

        2、評估RACE實驗可行性

        3、確認樣本信息

        4、根據客戶提供的信息設計好實驗方案,銷售做出報價合同

        4、客戶確定無誤后簽訂《沃森生物-RACE檢測服務合同》,并簽字(或蓋章)

        5、支付預付款,服務正式啟動

        6、根據合同實驗方案開展實驗

        8、實驗結束后,發送初步實驗報告

        9、支付實驗尾款

        10、提供詳細實驗報告,完成實驗項目

        材料提交說明

        實驗樣品

        1、組織或者細胞:提供盡可能多的新鮮組織或細胞樣品(包括3個技術重復),組織樣品不少于200 mg,細胞至少107個

        2、RNA樣品:3’ RACE:Total RNA>15μg;5’ RACE:Total RNA>25μg(注:OD260/OD280在1.9-2.1之間,完整性好)

        序列信息:

        1、大于200bp的已知序列(請注明已知序列的5’ 端及3’ 端):如果已知序列比較短,建議先進行3’ RACE再進行5’ RACE,以提高實驗的成功率

        2、實驗數據和參考文獻:這將會幫助我們更好地理解您的實驗背景,有利于實驗的順利進行

        結果交付

        實驗結題報告:包括實驗步驟,引物信息,實驗過程 PCR產物照片,全長序列拼接結果;

        測序原始數據:測序彩色波形圖、堿基序列圖;

        實驗產物:引物、PCR產物、測序用質粒(限產生克隆測序的情況)。


        毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術研發和科研技術服務的公司,公司建有專業的分子生物學、細胞生物學、組織病理學實驗室,為眾多生物醫藥企業、科研機構、醫院及高校提供分子生物學、細胞生物學、病理形態學等方面科研服務。公司核心團隊曾在國內外許多優秀學府從事過多年研發工作,秉承“為客戶創造價值,為員工實現夢想,為社會創造財富"的經營理念,堅持以技術創新為先導,以服務質量為根本,為中國生物醫藥和科學研究提供優質的產品和技術服務。



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